METODE CAWAN AGAR UNTUK MENGHITUNG MIKROORGANISME TANAH

METODE CAWAN AGAR UNTUK MENGHITUNG MIKROORGANISME TANAH
(Laporan Praktikum Biologi dan Kesehatan Tanah)






Oleh
Kelompok 2
Miandri Sabli P
Ni Wayan Devi
Reza Prasetya
Tety Maryenti
Tiya Oviana














PROGRAM STUDI AGROTEKNOLOGI
FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS LAMPUNG
2012




I.    PENDAHULUAN


A.    Latar Belakang
Metode cawan agar merupakan metode yang paling sering dipakai untuk menghitung jumlah mikroorganisme.  Pendugaan jumlah mikroorganisme yang terdapat di dalam tanah yang terbawa erosi, air, limbah, hasil pertanian dan makanan juga menggunakan metode ini.  Jumlah total mikroorganisme yang terdapat di dalam tanah digunakan sebagai indeks kesuburan tanah tanpa mempertimbangkan hal-hal lain. Tanah yang subur mengandung banyak mikroorganisme karena populasi yang tinggi menggambarkan adanya suplai makanan dan energi yang cukup, serta kondisi ekologi lain yang mendukung perkembangan mikroorganisme tanah tersebut.  Jumlah organisme dalam tanah harus diperhitungkan sebagai deskripsi dan tidak untuk indeks kesuburan tanah semata-mata.

 Metode hitungan cawan agar didasarkan pada anggapan bahwa setiap sel yang hidup akan berkembang menjadi satu koloni.  Jadi jumlah koloni yang muncul pada cawan merupakan suatu indeks bagi jumlah organisme yang dapat hidup serta terkandung dalam sampel.  Teknik yang harus dikuasai dalam metode ini ialah pengenceran sampel dan mencawankan hasil pengenceran tersebut.  Setelah inkubasi, jumlah koloni masing-masing cawan diamati.  Untuk memenuhi persyaratan statistik,  cawan yang dipilih untuk perhitungan koloni ialah yang mengandung antara 30-300 koloni.  Karena jumlah mikroorganisme dalam sampel tidak diketahui sebelumnya, maka untuk memperoleh sekurang-kurangnya satu cawan yang mengandung koloni dalam jumlah yang memenuhi syarat tersebut maka harus dilakukan sederetan pengenceran dan pencawanan.

B.    Tujuan
Adapun tujuan dari praktikum kali ini adalah:
1.    Untuk mengetahui cara menghitung mikroorganisme tanah dengan menggunakan metode cawan agar
2.    Untuk menghitung jumlah koloni bakteri yang diperoleh dari metode cawan agar
3.    Untuk menghitung koloni fungi yang ada di tanah dengan metode cawan agar




























II.    METODOLOGI PERCOBAAN

A.    Alat dan Bahan
Adapun alat yang digunakan adalah sebagai berikut:
•    Erlenmeyer 250 ml
•    Tabung reaksi
•    Kapas
•    Timbangan
•    Pipet ukur steril
•    Autoklaf
•    Cawan petri
•    Label
•    Bunsen
•    dan Inkubator

Sedangkan bahan  yang digunakan adalah:
•    8,5 g NaCl
•    Aquades
•    10 g sampel tanah
•    Pepton 5 g
•    NaCl 5 g
•    Beef extract 3 g
•    Agar 15 g
•    Akuades 1000 ml
•    Glukose 1 g
•    K2HPO4 0,5 g
•    KNO30,1 g
•    Ekstrak tanah 100 ml
•    Mg SO4.7H2O  0,5 g
•    Dekstrose 10 g
•    Pepton 5 g
•    K2HPO4 1 g
•    Rose bengal 33 mg
•    Streptomisin 3 ml
•    Agar 20 g
•    dan Akuades 1000 ml

B.    Cara Kerja
•    Pembuatan Seri Pengenceran
1.    Dibuat larutan fisiologis (8,5 NaCl dalam 1 liter akuades)
↓
2.    Dimasukkan 90 ml larutan fisiologis ke erlenmeyer 250 ml
↓
3.    Disiapkan tabung reaksi dan dimasukkan sebanyak 9 ml larutan fisiologis serta disiapkan sampel tanah sebanyak 7 tabung reaksi
↓
4.    Ditutup erlenmeyer dan tabung reaksi dengan sumbat kapas
↓
5.    Dimasukkan erlenmeyer beserta tabung reaksi ke autoklaf selama 20 menit pada suhu 121oC
↓
6.    Didinginkan larutan tersebut sampai suhu antara 42-45oC
↓
7.    Ditimbang 10 g sampel tanah dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer kemudian dikocok
↓
8.    Diambil pipet ukur steril dan diteteskan 1 ml larutan tanah dari erlenmeyer ke dalam tabung reaksi
↓
9.    Digunakan pipet steril untuk memindahkan 1 ml larutan 10-3 ke dalam 9 ml larutan fisiologis. Dilanjutkan sampai pada pengenceran 10-8

•    Pembuatan Medium Biakan
1.    Dilarutkan masing-masing bahan pembuatan agar nutrient dan agar ekstrak tanah ke dalam erlenmeyer
↓
2.    Disterilkan medium ke dalam autoklaf dengan suhu 121oC selama 15 menit

•    Prosedur Isolasi
1.    Diambil 1 ml larutan tanah dari seri pengenceran 10-4 -10-8 dan dimasukkan ke dalam cawan petri steril tanpa medium
↓
2.    Dituangkan ≤ 12-15 ml medium biakan bersuhu 40-50oC yang berisi 1 ml larutan tanah
↓
3.    Diberi label pada masing-masing cawan petri
↓
4.    Diinkubasi biakan mikroorganisme pada suhu ruang 28-30oC

•    Pengamatan
1.    Dilakukan pengamatan terhadap pertumbuhan fungi dan bakteri mulai hari ke-2/ke-3 setelah diinkubasi
↓
2.    Dihitung dan dicatat jumlah koloni yang muncul dan ditentukan ada berapa jenis







III.     HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN

A.  Data Pengamatan
Pengenceran    Jumlah Koloni Fungi
    Hitam    Putih
10-3    38    43
10-4    3    21
10-5    -    17
10-6    -    7

Pengenceran    Jumlah Koloni Bakteri
10-4    49
10-5    34
10-6    24
10-7    4
10-8    1

B.  Pembahasan
Dari tabel dapat dilihat jumlah koloni fungi tertinggi pada pengenceran 10-3, dimana jumlah fungi yang berwarna hitam 38 sedangkan yang berwarna putih 43.  Jumlah fungi paling sedikit terdapat pada pengenceran 10-6 yaitu jumlah fungi keseluruhan 7.  Pada cawan fungi juga tedapat kontaminan yang diduga kontaminan dari bakteri.  Kemudian  dari hasil pengamatan cawan bakteri, jumlah koloni terbanyak yaitu pada pengenceran 10-4 sejumlah 49 koloni.  Sedangkan jumlah paling sedikit pada pengenceran 10-8 yaitu dengan jumlah bakteri 1 koloni.

Dari identifikasi mikroorganisme yang telah dilakukan fungi yang berwarna hitam merupakan fungi Aspergillus niger. Berdasarkan pendapat Schlegel dan Schmidt (1994), Aspergillus niger merupakan fungi yang berasal dari filum Ascomycetes, dimana fungi ini memiliki filamen hifa berseptat dan dapat ditemukan melimpah di alam.  Koloni fungi ini ditemukan berwarna putih ketika tumbuh di media agar dan lama kelamaan berubah menjadi hitam ketika konidianya terbentuk.

Sedangkan koloni bakteri yang berwarna putih yang diidentifikasi merupakan bakteri Azospirilium sp.  Menurut Rahmawati (2005), bakteri ini dapat meningkatkan efisiensi penyerapan N2.  Selain itu, dapat menurunkan kehilangan N akibat pencucian.  Menurut Lestari (2007), Azospirilium sp merupakan bakteri yang menghasilkan asam indoasetat yang dapat meningkatkan tinggi tanaman serta dapat membantu dalam pemanjangan akar.  Pada cawan agar terlihat bakteri ini membentuk koloni diatas permukaan media agar dengan membentuk cembungan bening.

Kontaminasi yang ditemukan di cawan agar pada koloni fungi,  diduga kontaminasi dari bakteri.  Terjadinya kontaminasi disebabkan oleh kesalahan praktikan yang kurang menjaga kesterilan alat-alat yang digunakan saat praktikum ataupun saat menginokulasi mikroorganisme praktikan tidak mensterilkan tangan dengan alkohol serta tidak memakai masker penutup hidung dan mulut.














IV.     KESIMPULAN

Adapun kesimpulan dari praktikum kali ini adalah:
1.    Jumlah koloni tertinggi pada pengenceran 10-3 yaitu koloni fungi yang berwarna hitam 38 koloni dan fungi yang berwarna putih 43 koloni.
2.    Jumlah koloni tertinggi bakteri pada pengenceran 10-4 yaitu 49 koloni.
3.    Fungi hitam yang ditemukan di cawan agar merupakan spesies Aspergillus niger.
4.    Pada cawan bakteri terlihat cembungan bening di permukaan agar yang merupakan bakteri  Azospirilium sp.
5.    Terdapat kontaminasi bakteri pada cawan yang berisikan koloni fungi dan diduga kesalahan praktikan menjadi penyebab terjadinya kontaminasi.




















DAFTAR PUSTAKA

Lestari. 2007.  Pengaruh Hormon Asam Indoasetat yang Dihasilkan Azospirilium sp Terhadap Perkembangan Akar Padi. Jurna Agrobiogen 3(2) : 66-72

Rahmawati ,N.  2005.  Pemanfaatan Biofertilizer pada Pertanian Organik. Fakultas Pertanian USU.  Medan.

Schlegel, H.G dan K. Schmidt.  1994.  Mikrobiologi Umum Edisi 6 Terjemahan.  Tedjo Baskoro.  UGM Press Yogyakarta.




















PERHITUNGAN

Fungi berwarna putih
43 x 10-3    = 43000 x 106
7   x 10-4    = 700     x 106
17 x 10-5    = 170     x 106
21 x 10-6    = 21       x 106  +
           43891 x 106 : 4 = 10972,75 x 106 cfu/ml sampel tanah

Fungi berwarna hitam
38 x 10-3    = 38000 x 106
3   x 10-6    = 3         x 106  +
           38003 x 106 : 2 = 19001,5 x 106 cfu/ml sampel tanah
Bakteri
49 x 10-4    = 490000 x 108
39 x 10-5    = 34000   x 108
24 x 10-6    = 2400     x 108
4   x 10-7    = 40         x 108
1   x 10-8    = 1           x 108 +
   526441 x 108 : 5 = 105288,2 x 108 cfu/ml sampel tanah


NB : JANGAN LUPA KASIH KOMENTAR SAMA JOIN KE SITE INI YAAAA :D MAKASIHHH